114年:(醫檢)檢驗(1)

萃取組織核酸的順序,由formalin-fixed, paraffin-embedded(FFPE)的deparaffin至核酸萃取為:  ①xylene ②proteinase K ③ethanol ④DNase或RNase

A①②③④
B②①③④
C①③②④
D④①②③

詳細解析

本題觀念:

本題在考察從FFPE(formalin-fixed, paraffin-embedded)組織塊中萃取核酸的去石蠟(deparaffin)及後續純化步驟順序。FFPE樣本需先以有機溶劑溶解石蠟,再透過酒精脫溶劑並重水化組織,接著以Proteinase K消化蛋白交聯,最後視需求加入DNase或RNase去除殘留的DNA或RNA,以獲得純度較高的目標核酸。

選項分析

  • 選項A(①②③④):xylene→proteinase K→ethanol→DNase/RNase
    錯誤。若在去石蠟後立即加入Proteinase K,組織上仍殘留未洗脫的有機溶劑與paraffin,會抑制酵素活性,且未先以ethanol移除xylene並重水化組織,Proteinase K無法有效作用。

  • 選項B(②①③④):proteinase K→xylene→ethanol→DNase/RNase
    明顯不合邏輯,Proteinase K應在去除paraffin及重水化後才能與組織親水部分接觸;若先用Proteinase K處理尚未去石蠟的組織,酵素無法接觸實質組織,萃取失敗。

  • 選項C(①③②④):xylene→ethanol→proteinase K→DNase/RNase
    正確。先以xylene去石蠟,再以95% et

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