關於巢式聚合酶連鎖反應（ nested PCR ）的敘述，下列何者最不適當？

本題觀念：

巢式聚合酶連鎖反應（nested PCR）為增強PCR特異性及靈敏度而衍生之改良技術。此法分兩次PCR：第一次以 outer primers 放大包含目標序列之較長片段，第二次以 inner primers 於該片段內部再次放大，可降低非特異性擴增並提升檢測低量模板之成功率(pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。

選項分析

• 選項A：將第一次PCR反應的產物作為第二次PCR反應的模板。
  正確，nested PCR 即以第一次擴增產物為第二次反應之起始模板，確保第二次僅放大首輪擴增到之序列(pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。

• 選項B：需設計兩組引子（primers）。
  正確，nested PCR 需一對外部引子（outer primers）和一對內部引子（inner primers），合計兩組以完成兩輪反應([pcrtechbio.com](https://www.pcrtechbio.com/resource/pcr-introduction/neste

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