114年:(醫檢)檢驗(2)
序列特異聚合酶連鎖反應( polymerase chain reaction -seguence -specific primers, PCR -SSP)是基於sequence -specific primers 進行多樣性基因分型,下列敘述何者最不適當?
A臨床上可用在 human leukocyte antigen (HLA)typing
B使用的Taq DNA polymerase ,需要有 3'端至5'端exonuclease 活性
C操作時,需有增幅內生性對照組( internal control )
D反應完後,需要進行電泳分析
詳細解析
本題觀念:
序列特異引子聚合酶連鎖反應(PCR-SSP)利用3′端完全互補的引子才能有效延伸,當引子3′端對基因座的等位基因有單一鹼基不匹配時,因引子延伸效率極低而無法放大。此特性使PCR-SSP能快速且高特異性地分型多樣性基因,臨床最常用於HLA typing等領域。
選項分析
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選項A
臨床上確實可用在HLA typing,早期即有多篇研究利用PCR-SSP快速準確地對HLA-DR、HLA-B、HLA-C等位基因進行分型,適用於腎臟或造血幹細胞移植配對等場合,操作時間僅需數小時,準確度與血清學方法相當甚至更佳 (pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。 -
選項B
PCR-SSP 特異性建立於引子3′端與目標序列若存在不匹配,Taq polymerase就無法延伸而阻斷放大。Taq DNA polymerase正因缺乏3′→5′ exonuclease(proofreading)活性,才不會修復此類不匹配,才能保證等位基因的鑑別;故不需要且不能有3′→5′ exonuclease活性 ([creative-biolabs.com](https://www.creative-biolabs.com/seque
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