下列何者是用多對引子（ primers）同時偵測多種可能病毒感染的方法？

本題觀念：

本題聚焦於PCR技術的不同應用變化，特別是如何利用多組引子（primers）在一次反應中同步偵測多種目標序列，以快速篩檢可能的多重病毒感染。

選項分析

• 選項A nested PCR
  Nested PCR採用兩輪放大，每輪各使用一對引子，第二輪的引子位在第一輪擴增區段內，主要目的是提高靈敏度與特異性，並非一次同時偵測多個不同病毒，而是針對單一目標進行二次「巢式」放大以排除非特異性擴增(pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。

• 選項B multiplex PCR
  Multiplex PCR在單一反應管中加入兩對以上的引子，每對引子專一於不同目標序列，可同時擴增多個片段，用於多重病原體篩檢。每個產物設計不同長度或標記，透過電泳或螢光探針區分並定性定量(foodsafety.institute)。

• 選項C hybrid capture assay
  Hybrid capture採用合成探針與樣本中待測核酸雜交，再以抗體或鏈黏素富集DNA-RNA雜交體並檢測，屬於探針捕獲技術，用於病毒核酸定量與定序前的富集，並非多重引子同時擴增(pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。

• 選項D random PCR
  Random PCR（或稱random multiplex PCR）使用大量隨機寡核苷酸引子，以非特定方式放大樣本中所有核酸，適合未知病原體或高突變率病毒的探索性檢測，但因缺乏專一性，不同於針對已知多重目標序列的同步檢測(pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。

答案解析

要在單一PCR反應管中同時偵測多種已知病毒的存在，必須在配方中加入針對各病毒基因序列的多組專一性引子。這正是multiplex PCR的核心：一鍋多對引子，並同時執行多個特異性擴增。透過設計不同大小的產物或使用可區分的螢光探針，在同一電泳或即時PCR平台即可分辨並報告多重結果。其他方法如nested PCR或hybrid capture各有增敏或核酸富集功能，但無法一次性利用多對專一引子平行放大多個不同目標；random PCR則為非專一性擴增，難以精準定性已知病毒序列。因此答案選B multiplex PCR。

核心知識點

• PCR技術變化：standard PCR、nested PCR、multiplex PCR、random PCR、hybrid capture assay
• 引子設計原則：專一性、退火溫度、產物大小差異
• multiplex PCR應用：多重病原體檢測、SNP分型、基因重排篩檢
• nested PCR應用：提高靈敏度與特異性，用於低拷貝數或抑制物存在樣本
• hybrid capture應用：NGS前目標區域富集、病毒基因組定序
• random PCR應用：未知病原體探索、綜合性微生物組分析

臨床重要性

multiplex PCR廣泛應用於呼吸道病毒面板、腸道病毒群篩、性病病原同時檢測等臨床診斷，可加速診斷速度、節省樣本與試劑並提高檢測通量，對於快速辨識多重病毒感染並指導抗病毒策略具有重要意義。