有關流式細胞儀的敘述，下列何者錯誤？

本題觀念：

流式細胞儀(flow cytometry)的操作原理包含光散射(light scatter)與螢光偵測(fluorescence detection)兩大面向，前者可用來快速區分細胞大小及內在顆粒度，後者結合標記抗體或功能性探針，可做細胞表面抗原定量、凋亡/存活分析及白血球功能檢測。

選項分析

• 選項A 染單核球細胞須注意 Fc receptor 問題
  單核球、巨噬細胞等免疫細胞表面高度表現 Fcγ 受體，若不先行封阻(Fc block)，抗體的 Fc 端易非專一性黏附造成背景升高。因此染色前須以人血清或純化 IgG 等試劑封阻 Fc 受體，才能保證染色特異性。(pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)

• 選項B 可以做嗜中性白血球的功能性分析
  流式細胞儀可用探針如 DCFH-DA、DHR-123 檢測嗜中性球氧化爆發(oxidative burst)、以螢光標定細菌或顆粒評估吞噬功能，並可同時分析凋亡、細胞表面標誌等多重參數。此法已廣泛用於原發性免疫缺陷(如 CGD)及感染性疾病的診斷。(pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)

• 選項C 細胞存活率檢測需要酒精固定再染色
  傳統活/死染色(如 PI、7-AAD)乃依賴細胞膜完整性，需活細胞於染色前保持未固定狀態，方可排除 PI。若以酒精(或其他穿透性固定劑)先固定，所有細胞膜均被破壞，無法分辨存活與死亡細胞；後續須使用專用「可固定型」活/死試劑(amine-reactive dyes)並以甲醛交聯固定，而非單純酒精固定。(commerce.thermofisher.com)

• 選項D 前方散射光可以反應出細胞大小
  前向散射光(Forward Scatter, FSC)收集與入射雷射小角度散射的光，光強度與細胞體積/大小大致成正比；側向散射(SSC)則反映細胞顆粒度。FSC-SSC 圖常用於區分淋巴球、單核球與粒細胞。(ncbi.nlm.nih.gov)

答案解析

只有選項C錯誤。活/死分析必須在細胞未被酒精或其他穿透性固定劑破壞細胞膜前進行，才能正確區分活細胞(排除染劑)與死細胞(染劑進入)。若需固定後仍保留活/死訊號，必須使用專用的「fixable viability dyes」(amine-reactive)，而非酒精固定再以常規 PI/7-AAD 染色。

核心知識點

• Flow cytometry 基本光學原理
  • Forward Scatter (FSC) ~ 細胞大小
  • Side Scatter (SSC) ~ 顆粒度
• 抗體染色注意事項
  • Fc receptor 封阻以避免非專一性結合
• 活/死染色原理
  • PI、7-AAD 依賴細胞膜完整性，須於未固定時使用
  • 可固定型活/死試劑(amine-reactive dyes)僅限於甲醛固定
• 嗜中性球功能檢測
  • 氧化爆發(oxidative burst)
  • 吞噬功能(phagocytosis)

臨床重要性

正確區分細胞存活與死亡，並精準評估免疫細胞功能，對於臨床免疫評估、腫瘤標誌物定量及感染免疫學檢驗均至關重要。