下列何者經訊號增幅的方式偵測病毒核酸？

本題觀念：

本題聚焦於分子檢驗中「信號放大（signal amplification）」與「目標序列放大（target amplification）」兩種技術的區別。信號放大透過放大探針或標記物來增強檢測訊號；目標放大則是直接複製樣本中的核酸序列，以提高檢測靈敏度。

選項分析

• 選項A branched DNA
  Branched DNA（bDNA）屬於信號放大技術：

  1. 樣本中的目標RNA/DNA先經由捕捉探針捕獲於固相載體上，再依序以label extender、preamplifier、amplifier等分子「串聯」組裝，每個放大分子可攜帶多個酵素標記，最後酵素催化產生可量化之光學或電化學訊號。
  2. bDNA並不複製目標核酸，而是放大與目標序列雜交後所產生的訊號，故屬信號放大法 (en.wikipedia.org)。

• 選項B nucleic acid sequence–based amplification (NASBA)
  NASBA為等溫目標序列放大技術：

  1. 透過reverse transcriptase、RNase H及T7 RNA polymerase循環作用，使RNA模板逆轉錄、降解及再轉錄，最終生成大量RNA產物。
  2. Amplification產物即為目標核酸本身，需要以探針雜交或分子探針即時偵測，屬目標放大法 (pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。

• 選項C recombinase polymerase amplification (RPA)
  RPA為等溫目標序列放大技術：

  1. 利用recombinase、single-stranded DNA-binding protein（SSB）及strand-displacing polymerase，於37–42°C條件下，讓引子入侵雙股DNA並進行延伸，迅速產生大量DNA擴增產物。
  2. 直接複製並放大樣本中之DNA（或先逆轉錄RNA），屬目標放大法 (en.wikipedia.org)。

• 選項D transcription mediated amplification (TMA)
  TMA與NASBA類似，屬目標序列放大技術：

  1. 引物一端含T7 RNA polymerase啟動子序列，透過reverse transcriptase進行逆轉錄及RNase H切割，再由T7 RNA polymerase大量轉錄產生RNA擴增產物。
  2. 結果為核酸本身之放大，屬目標放大法 (neb.com)。

答案解析

只有branched DNA（選項A）透過放大標記訊號而不複製目標核酸，即屬信號放大技術；NASBA、RPA及TMA均屬目標序列放大技術，需要直接擴增樣本中之核酸序列以提升靈敏度。題目問「經訊號增幅的方式偵測病毒核酸」，正確答案為A。

核心知識點

• 信號放大（signal amplification）vs 目標放大（target amplification）原理差異
• bDNA assay結構與工作流程：capture probe → label extender → preamplifier → amplifier → 標記酵素
• NASBA、RPA、TMA等常見等溫放大技術機制
• 臨床上bDNA在HIV、HCV病毒量監測之應用
• 掌握不同分子檢驗技術之優缺點與適用情境