運用reverse hybridization的核酸檢驗套組進行C型肝炎病毒的基因分型，其檢驗步驟由前至後順序，何者正確？①特異性引子進行PCR擴增標的cDNA　②擴增產物與基因型特異的寡核苷酸探針陣列進行雜交反應③RNA反轉錄成互補DNA　④檢體製備　⑤肉眼判讀Ｃ型肝炎病毒基因分型　⑥進行呈色反應

本題觀念：

核酸逆向雜交（reverse hybridization）技術用於HCV基因分型時，必須依序完成：檢體中RNA萃取、RNA反轉錄為cDNA、利用特異性引子做PCR放大（通常含有biotin標記）、將放大產物與固相化的基因型特異性探針雜交、酵素顯色反應，最後肉眼判讀顏色沉澱結果。

選項分析

• 選項A（④①②③⑤⑥）
  先做檢體製備正確（④），但緊接著直接進行PCR放大（①），此時尚未反轉錄，無法以RNA為模板做PCR，順序錯誤。

• 選項B（④①③②⑥⑤）
  同樣先PCR（①）再反轉錄（③），顛倒反轉錄與PCR順序，不合邏輯。

• 選項C（④③①②⑥⑤）
  正確流程：檢體製備→反轉錄→PCR放大→探針雜交→顯色反應→肉眼判讀。符合reverse hybridization流程(journals.asm.org)。

• 選項D（③①④②⑤⑥）
  第一步就做反轉錄（③），但此時未先做檢體製備（RNA萃取），錯誤。

答案解析

reverse hybridization line-probe assay（如INNO-LiPA HCV II）操作包含：

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