113年:(醫檢)檢驗(2)
下列那一個分子檢驗技術最適合評估與檢測腫瘤突變負荷（tumor mutation burden）？
A桑格定序法（Sanger sequencing）
B即時定量聚合酶連鎖反應（real-time qPCR）
C次世代定序（next-generation sequencing, NGS）
D數位化聚合酶連鎖反應（digital PCR）
詳細解析
本題觀念：
腫瘤突變負荷（tumor mutation burden, TMB）是單位基因組（通常以 Mb 計）中非同源突變數量，與免疫檢查點抑制劑治療反應密切相關。評估 TMB 需要同時檢測大量基因的突變，以統計整體突變數目；此項目對序列深度、覆蓋範圍及通量要求高。
選項分析
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選項A 桑格定序法（Sanger sequencing）
桑格定序適用於單一或少數基因序列的精確定序，通量低、成本高，無法在合理時間內同時偵測或統計上千～上萬個基因區域的突變。研究顯示，Sanger 對於低於 15% 突變等位基因頻率的變異無法檢出，且不具大規模並行能力，故不適用於 TMB 評估(pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。 -
選項B 即時定量聚合酶連鎖反應（real-time qPCR）
qPCR 需針對已知突變設計探針，只能定量特定基因或熱點突變，無法進行大範圍、假設自由（hypothesis-free）的全基因組或全外顯子測序。其通量及覆蓋範圍受限，不適用於統計全外顯子或大面積基因面板的總突變數目([illumina.com](https://www.illumina.com/science/technology/
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