112年:(醫檢)檢驗(1)
承上題【如圖所示為利用 DNA 甲基化晶片進行實驗分析的結果,下列敘述何者最正確?】,根據上圖,測試樣本的 DNA甲基化結果,下列何者最正確?
A待分析的CpG位點具有甲基化
B待分析的CpG 位點不具有甲基化
C實驗結果品質欠佳,無法判讀
D需要進行其他的檢驗才能下結論
詳細解析
本題觀念:
本題聚焦於利用 bisulfite 處理後 DNA 的化學差異,結合 Infinium 型 DNA 甲基化晶片(Methylation Array)的雙探針設計原理,藉由比較「甲基化探針(M probe)」與「未甲基化探針(U probe)」之雜交強度,來判讀特定位點(CpG)是否具有 5-mC 甲基化。
影像分析:
題中示意圖分為上下兩部分:
- 上方標記 U(unmethylated)之灰黑探針,為「未甲基化偵測探針」。紅框內標示探針序列為 C A G T,此為 primer 與目標序列配對處,專門對應「經重亞硫酸鹽處理後,若該 C 未被甲基化,則被轉化為 U(PCR 中呈現為 T)的序列」。
- 下方標記 M(methylated)之灰黑探針,為「甲基化偵測探針」。紅框內標示序列 C* G T,代表此探針專門與「保留甲基化而未被 bisulfite 轉化的 C 位置」配對。
兩探針皆與綠色線條(bisulfite 處理後的 DNA 樣本)進行雜交;若樣本在該 CpG 位點原本為未甲基化,處理後 C→U→T,則只會與 U 探針序列完全配對並產生螢光訊號;反之,若該位點原為甲基化,則 C 保留、會與 M 探針序列配對。
從示意圖可知,本題所示「待分析的 CpG 位點經 bisulfite 處理後,樣本 DNA 與 U 探針序列互補配對」,顯示未甲
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