112年:(醫檢)檢驗(2)

關於目前臨床上較常使用的兩個次世代定序平台的敘述,下列何者最不適當?

AIllumina定序平台主要以橋式 PCR ( bridge PCR )的方式來進行增幅
BIllumina的可逆性中斷子定序( reversible terminator-based sequencing )是利用帶有不同顏色螢光標記的可逆 性中斷子( reversible terminator )來進行反應
C賽默飛世爾( ThermoFisher )公司的 Ion Torrent 平台是用乳化 PCR ( emulsion PCR )來擴增核酸片段
DIon Torrent所使用的半導體定序技術是偵測 DNA 聚合反應時產生之焦磷酸根離子造成 pH 值的變化

詳細解析

本題觀念:

比較 Illumina 與 Ion Torrent 兩大次世代定序(Next-Generation Sequencing, NGS)平台的關鍵原理,包括聚合方式(amplification)與定序檢測機制。

選項分析

  • 選項A
    Illumina 定序平台於 flow cell 上利用固定在固相表面的引子(primers)與 DNA 片段上的接頭(adapters)做「橋式增幅(bridge PCR)」以生成同源叢集(clusters),作為後續定序反應的模板。此為 Illumina SBS(Sequencing by Synthesis)技術第一步驟,廣泛應用於 HiSeq、MiSeq 與 NextSeq 等儀器。 (biotechtutorials.com)

  • 選項B
    Illumina 的定序過程採用「可逆性中斷子(reversible terminator)定序」,在每一個 cycle 中加入帶有螢光標記且有阻斷基團的 dNTP,完成單一鹼基延伸後以光學影像辨識螢光顏色,再化學去除螢光及阻斷基團,恢復 3’–OH 以繼續下一輪反應。 ([thermofis

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