112年:(醫檢)檢驗(2)
若想要利用轉錄介導的擴增法( transcription-mediated amplification, TMA )執行 HCV 病毒量的檢測,下列何者錯誤?
A採用恆溫的反應過程,可以在乾浴器( heat block )或水浴槽中進行反應
B此法需要使用 TaqMan probe
C此法使用雜交保護分析( hybridization protection assay, HPA )偵測結果
D全程反應在單一試管中執行,不需要清洗步驟
詳細解析
本題觀念:
本題檢測 Transcription-Mediated Amplification(TMA)技術的原理與應用,重點在於了解 TMA 的放大機制(isothermal amplification)、所使用的酵素與引子、偵測方法(Hybridization Protection Assay, HPA)以及其操作流程特色(單管反應、無清洗步驟)與傳統 PCR(需熱循環、TaqMan 探針)之差異。
選項分析
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選項A
描述 TMA 採用恆溫反應,可在乾浴器或水浴槽中進行,不需熱循環儀。根據 TMA 原理,僅需維持單一溫度使逆轉錄酶(RT)和 RNA 聚合酶作用,即可達到指數型放大;整個反應可在水浴或乾浴器中完成,無須熱循環儀。 (bio.davidson.edu)
因此,本項描述正確。 -
選項B
指出此法需要使用 TaqMan probe。實際上,TaqMan probe 屬於 real-time PCR 偵測方式,利用探針上 5’ 報告基團和 3’ 消色基團的 FRET 機制;TMA 則普遍採用 HPA 偵測,以 acridinium e
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