112年:(醫檢)生化(1)
有關 real time PCR 的敘述，下列何者正確？
A可準確定量 DNA 總量
B不可使用螢光標記（label）
C可以即時監測 PCR 產物
D必須先做熔解曲線分析（melting curve analysis）
詳細解析
本題觀念
本題著眼於 real-time PCR（又稱 qPCR）的核心原理：利用螢光訊號即時監測 PCR 產物累積，並可依據螢光強度變化進行定量分析。
選項分析
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選項A “可準確定量 DNA 總量”
real-time PCR 透過測量特定目標序列的螢光累積曲線（Cₜ 值），可進行絕對或相對定量，但其定量範圍限於標靶序列的複製數量，並非對樣本中所有 DNA（如全部基因組 DNA）的總量進行準確測定，仍需已知濃度之標準品校正曲線才能推算初始模版數(pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。 -
選項B “不可使用螢光標記（label）”
real-time PCR 之所以能即時偵測，是因為在反應體系中加入能與雙股 DNA 結合之 intercalating dye（如 SYBR Green）或標靶專一性探針（如 TaqMan probes、molecular beacons）並以螢光讀取產物量，完全仰賴螢光標記技術，與選項敘述相反([en.wikipedia.org](https://en.wikipedia.org/wiki/Real-time_polymerase_chain_
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