下列何種檢測方式無法鑑別國人 B3表現型之所有已知基因型？

本題觀念：

ABO血型B3亞型的分子基礎及分子檢測策略。B3亞型常見於台灣族群，主因是ABO基因第3內含子5′剪接位點突變（IVS3+5G→A），亦可見247G→T（Asp83Tyr）及少數其他外顯子或啟動子區位點變異，造成B抗原表現減弱與外觀混合沈降現象。正確鑑別所有已知B3基因型需偵測多個不同核苷酸位點，檢測方法應能涵蓋外顯子、內含子及調控序列變異。

選項分析

• 選項A Allele-specific oligonucleotide hybridization
  以已知變異位點設計完全互補（perfect‐match）與單鹼基不配對（mismatch）短探針，於微陣列表面與樣本DNA雜交，可針對IVS3+5G>A、247G>T、259G>T及-68G>T等已知SNP設計探針，藉強制洗脫條件（stringent wash）區分各等位基因，理論上可同時覆蓋所有已報導B3變異位點(ncbi.nlm.nih.gov)。

• 選項B Allele-specific PCR
  採用專一引子於3′端辨識單一核苷酸差異，對每一個目標SNP設計不同的等位基因特異性引子，經PCR擴增後以電泳或即時螢光定量

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