111年:(醫檢)檢驗(2)
針對單分子即時定序（ single molecule real-time sequencing, SMRT ）的敘述，下列何者最正確？
A單分子即時定序是所有高通量基因定序的設計原理
B單分子即時定序無須進行核糖核酸擴增，因此不需要使用 DNA 聚合酶
C相較於二代定序產出的讀長（ reads ），單分子即時定序的讀長較長
D相較於二代定序，單分子即時定序較能準確測定基因產物的豐度（ abundance ）
詳細解析
本題觀念：
單分子即時定序（single molecule real-time sequencing, SMRT）屬第三代定序技術，利用零模波導（ZMW）微孔捕捉單分子DNA聚合酶於即時合成時釋放的螢光訊號，核心優勢包含超長讀長（long reads）、無PCR放大且低GC偏差、可直接偵測DNA修飾，但單次產出量（throughput）較二代定序少。
選項分析
-
選項A：“單分子即時定序是所有高通量基因定序的設計原理”
錯誤。高通量基因定序（高通量NGS）多數以橋式PCR（Illumina）或微滴PCR（Ion Torrent）為基礎，SMRT僅為其中第三代技術之一，非所有平台皆採ZMW單分子即時觀測原理 (genomebiology.biomedcentral.com)。 -
選項B：“單分子即時定序無須進行核糖核酸擴增，因此不需要使用 DNA 聚合酶”
錯誤。SMRT雖不需PCR放大即可定序DNA/RNA（cDNA）分子，但必須使用高度穩定的DNA polymerase於ZMW中催化合成，並觀測帶有螢光標籤的核苷進入活性位點時的螢光信號 ([link.s
...（解析預覽）...