111年:(醫檢)檢驗(1)
分子檢驗用於核酸擴增的引子（ primer ），通常對於序列有許多的考量通則，才能符合特異性需求；避免偽陽性發生的做法，下列何者錯誤？
A引子的 GC含量應控制在 30 ～ 70% 間
B應該避免形成引子雙體（ primer-dimer ）
C為提高特異性， primers 最好出現連續 4 個 G
Dreal time PCR的放大片段不要超過 400bp
詳細解析
本題觀念：
本題重點在於 PCR 核酸擴增實驗中，引子(primer)設計的原則，以確保特異性並避免偽陽性。關鍵考量包含：GC 含量、引子二聚體(primer-dimer)與髮夾結構、同源重複序列(尤其是連續相同鹼基)、以及 real-time PCR 擴增子(amplicon)的長度。
選項分析
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選項A 「引子的 GC含量應控制在 30 ～ 70% 間」
多數設計指南建議最佳 GC 含量介於 40–60%，但亦明示應避免低於 30% 或高於 70%，以防止結合穩定性不足或二級結構過度形成。因此，將 GC 含量控制在 30–70% 屬於合理的寬鬆範圍，可兼顧實驗可行性與特異性需求(oligopool.com)。 -
選項B 「應該避免形成引子雙體（primer‐dimer）」
引子間互補配對會消耗可用的引子，並造成非特異性訊號。所有 PCR 設計準則均強調需避開自我二聚體(self‐dimer)及互補二聚體(hetero‐dimer)結構，以提升擴增效率與特異性([cafgroup.lbl.gov](https://cafgroup.lbl.gov/protoc
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