111年:(醫檢)檢驗(1)
下列那種檢驗方法最不適宜用於檢測單一核苷酸的變異？
A螢光原位雜交法（ FISH ）
B直接定序法（ Sanger sequencing ）
C次世代定序法 （ Next-generation sequencing, NGS ）
D雙去氧核糖核酸指紋分析（ dideoxy DNA fingerprinting ）
詳細解析
本題觀念：
本題在考察不同分子檢驗技術對單一核苷酸變異（single nucleotide variant, SNV）的檢測能力與適用性。關鍵在於各技術的分辨率與敏感度：FISH（fluorescence in situ hybridization）屬於細胞/染色體層級，可偵測結構性重排或大範圍拷貝數變化，但解析度通常在數十至上百千位元組；相對地，Sanger sequencing、次世代定序（NGS）及dideoxy DNA fingerprinting（ddF）均能在核苷酸層級辨識單一鹼基的置換或小型變異。
選項分析
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選項A 螢光原位雜交法（FISH）
標準FISH探針通常為≥5–10 kb，利用螢光標記核酸寡聚體或BAC探針偵測染色體大片段異常，解析度受限於光學顯微鏡（約200–250 nm），最低可偵測約150 kb以上的刪除/放大變異，無法直接辨識單一鹼基的置換，因此最不適宜用於定點SNV檢測 (gna.it.com)。 -
選項B 直接定序法（Sanger sequencing）
Sanger定序以ddNTP終止技術，能直接讀取核苷酸序列並在鹼基層級偵測SNV，臨床上長期作為「金標準」；亦常用於確
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