111年:(醫檢)生化(1)
若以散射比濁法( nephelometry )偵測溶液中的蛋白 A ,下列處理何者最為適當?
A讓溶液中的蛋白變性
B加入蛋白 A 的抗體
C加入 Coomassie blue 染劑
D將溶液濃縮與透析
詳細解析
本題觀念:
本題在考察以散射比濁法(nephelometry)定量特定蛋白質時,如何使溶液中產生足夠的可測量散射顆粒。散射比濁法主要測量溶液中懸浮顆粒對入射光的散射強度,而臨床上常用抗原–抗體複合物作為散射顆粒,以達到高靈敏度定量目的。
選項分析
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選項A 讓溶液中的蛋白變性
變性會破壞蛋白的天然構型,可能造成少量聚集或澱粉狀沉澱,但這種非特異聚集的大小與數量無法準確控制,且易產生不穩定或不均一顆粒,無法做為精確定量之依據。 -
選項B 加入蛋白 A 的抗體
將特異性抗體加入含有抗原(蛋白 A)的溶液,即可形成抗原–抗體大分子複合物,這些免疫複合物在適當濃度下會懸浮於溶液中,散射入射光強度與複合物濃度成正比,最適合作為 nephelometry 的測量對象 (pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。 -
選項C 加入 Coomassie blue 染劑
Coomassie blue 是 Bradford assay 的試劑,量測原理是蛋白質與染劑形成染料–蛋白質複合物後在595 nm 處吸光度變化,此方法屬於比色法(colorimetry),非透過散射光測量。 -
選項D 將溶液濃
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