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115年:(醫檢)血液(1)

有關流式細胞儀分析周邊血液正常血球之敘述，下列何者正確？

Aforward scatter 訊號平均強度：淋巴球大於嗜中性球
Bside scatter 訊號平均強度：單核球大於淋巴球
CCD45螢光訊號平均強度：嗜中性球大於淋巴球
DCD45螢光訊號平均強度：紅血球大於淋巴球

詳細解析

本題觀念：

本題考查流式細胞儀（Flow Cytometry）在分析周邊血液白血球時的基本原理，特別是散射光訊號（FSC, SSC）與表面抗原螢光強度（CD45）在不同血球族群中的表現特徵。

  1. FSC (Forward Scatter, 前向散射光)：主要與細胞的**體積大小（Size）**成正比。
  2. SSC (Side Scatter, 側向散射光)：主要與細胞的**內部顆粒度（Granularity）或複雜度（Complexity）**成正比。
  3. CD45 (Leukocyte Common Antigen)：白血球共同抗原，表達強度可用於區分淋巴球、單核球與顆粒球（如嗜中性球）。

選項分析

  • A. forward scatter 訊號平均強度：淋巴球大於嗜中性球

    • 分析：錯誤。FSC 反映細胞大小。
    • 理由：在正常周邊血液中，淋巴球（Lymphocytes）通常是體積最小的白血球（約 7-10 μ\mum）；而嗜中性球（Neutrophils）體積較大（約 10-14 μ\mum）；單核球（Monocytes）通常最大（約 14-20 μ\mum）。
    • 結論：FSC 強度應為 嗜中性球 > 淋巴球（或 單核球 > 嗜中性球 > 淋巴球）。

  • B. side scatter 訊號平均強度：單核球大於淋巴球

    • 分析：正確。SSC 反映細胞內部顆粒度與複雜度。
    • 理由：
      • 嗜中性球：含有大量細胞質顆粒，SSC 訊號最強（最高）。
      • 單核球：細胞質較多，含有少量細微顆粒與空泡，SSC 訊號呈中等強度。
      • 淋巴球：細胞質少且幾乎無顆粒（Agranular），SSC 訊號最弱（最低）。
    • 結論：SSC 強度排序為 嗜中性球 >> 單核球 > 淋巴球。因此單核球的 SSC 確實大於淋巴球。

  • C. CD45螢光訊號平均強度：嗜中性球大於淋巴球

    • 分析：錯誤。CD45 的表達密度在不同白血球中有顯著差異。
    • 理由：在 CD45/SSC 點散圖（Dot plot）中，淋巴球表現出最強的 CD45 螢光訊號（CD45 bright）；單核球次之（CD45 bright/moderate）；而嗜中性球（屬於顆粒球）的 CD45 表現量相對較低（CD45 dim）。
    • 結論：CD45 強度應為 淋巴球 > 嗜中性球。這也是利用 "CD45 gating" 區分原始細胞（Blast, CD45 dim）與正常淋巴球的重要依據。

  • D. CD45螢光訊號平均強度：紅血球大於淋巴球

    • 分析：錯誤。
    • 理由：CD45 是「白血球共同抗原」，主要存在於有核白血球表面。成熟紅血球（RBC）與血小板通常不表達 CD45（CD45 negative）。淋巴球則是 CD45 表達最強的細胞。
    • 結論：CD45 強度應為 淋巴球 >> 紅血球。

答案解析

正確答案是 B。 在流式細胞儀的散佈圖中，單核球雖然不像嗜中性球那樣具有高顆粒度，但相較於幾乎無顆粒且結構簡單的淋巴球，單核球的細胞質複雜度較高，因此其 Side Scatter (SSC) 訊號強度高於淋巴球。

核心知識點：CD45 Gating (CD45/SSC 設門分析)

考生應熟記 CD45 vs SSC 散佈圖 中各細胞群落的典型位置，這是臨床檢驗白血病免疫分型的基礎：

  1. 淋巴球 (Lymphocytes)：CD45強 (Brightest)、SSC低 (Lowest)。位於圖形右下角。
  2. 單核球 (Monocytes)：CD45強至中 (Bright to Mod)、SSC中 (Intermediate)。位於淋巴球上方或右上方。
  3. 嗜中性球/顆粒球 (Neutrophils/Granulocytes)：CD45弱 (Dim)、SSC高 (Highest)。位於圖形中上方散開區域。
  4. 原始細胞 (Blasts)：CD45弱 (Dim)、SSC低 (Low)。位於 CD45 dim 區域（通常在淋巴球左側，嗜中性球下方），此區域稱為 "Blast window"。
  5. 紅血球碎片/雜質 (Debris/RBCs)：CD45陰性 (Negative)、SSC低。位於最左下角。

參考資料

  1. Cytometry 11:453–459 (1990) - Hematologics: "Lymphocytes have the highest expression of CD45 antigen... Neutrophils have approximately three- to fivefold [lower]..."
  2. Korean J Lab Med 2011;31:69-76: "The expression of CD45 was the highest on lymphocytes... intermediate on monocytes... and the lowest on granulocytes. The FSC was highest in monocytes... lowest in lymphocytes."
  3. StatPearls [Internet]. Flow Cytometry Blood Cell Identification: "The CD45 bright expression cells with a higher side scatter compared to lymphocytes are monocytes."
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