有關甲基藍染色（ methylene blue stain ）的敘述，下列何者最不適當？

本題觀念：

本題考查的是 甲基藍染色 (Methylene Blue Stain) 的特性、臨床應用及其染色結果。甲基藍（或稱 Loeffler's Methylene Blue）是一種單一鹼性染劑（Simple stain），主要用於觀察細菌的型態（Morphology）以及特定細菌的結構（如異染顆粒）。在臨床微生物檢驗中，除了用於鑑定白喉棒狀桿菌（Corynebacterium diphtheriae）外，也常用於腦脊髓液（CSF）的直接抹片檢查。

選項分析

• A. 可用於染 Haemophilus influenzae (流感嗜血桿菌)：適當。

  • 雖然革蘭氏染色（Gram stain）是標準方法，但在腦脊髓液（CSF）檢體中，革蘭氏陰性的 Haemophilus influenzae 有時因染色較淺或背景干擾而不易觀察。甲基藍染色能提供良好的對比度，使細菌呈現深藍色，易於與背景區分，因此教科書與指引常提及可用於 CSF 抹片以輔助觀察此菌的型態。

• B. 可用於染 Neisseria meningitidis (腦膜炎奈瑟氏菌)：適當。

  • 同選項 A，Neisseria meningitidis 為革蘭氏陰性雙球菌。在 CSF 檢體中，使用甲基藍染色可以更清晰地顯示其雙球菌型態，特別是在發炎細胞與蛋白背景較重的情況下，甲基藍能提供比革蘭氏染色更佳的對比（細菌深藍 vs. 背景淺藍）。

• C. 菌體染色後呈現深藍色：適當。

  • 甲基藍是一種鹼性染料（Basic dye），帶正電荷，會與細菌細胞內帶負電荷的酸性物質（如核酸 DNA/RNA）結合。因此，細菌本體會被染成深藍色。

• D. 背景為淺綠色：不適當。

  • 這是本題的錯誤敘述。在單純的甲基藍染色中，背景物質（如蛋白質、黏液或發炎細胞的細胞質）通常會被染成淺藍色 (Light Blue) 或無色（若沖洗乾淨），而非淺綠色。
  • 背景為淺綠色的情況通常見於使用 孔雀綠 (Malachite Green) 或 亮綠 (Light Green) 作為對比染劑的染色法，例如：
    • 芽孢染色 (Spore Stain)：芽孢呈綠色，菌體呈紅色（若用 Safranin 複染）。
    • Gimenez stain：某些細菌（如立克次體）染紅色，背景染綠色。
    • Grocott's Methenamine Silver (GMS)：黴菌染黑色，背景常以 Light Green 複染呈綠色。

答案解析

正確答案是 D。

甲基藍染色（Methylene Blue Stain）的主要結果是：細菌呈深藍色，背景呈淺藍色。選項 D 描述背景為淺綠色是不正確的，這通常是其他特殊染色（如含 Malachite Green 的染色）的特徵。

核心知識點

1. 甲基藍染色 (Loeffler's Methylene Blue)：
   • 原理：單一鹼性染劑，染核酸。
   • 結果：菌體深藍色，背景/白血球細胞質淺藍色，白血球核深藍色。
   • 應用：
     • 腦脊髓液 (CSF)：輔助觀察 H. influenzae 和 N. meningitidis（提供比革蘭氏染色更好的對比）。
     • 白喉棒狀桿菌 (C. diphtheriae)：觀察異染顆粒 (Metachromatic granules / Babes-Ernst granules)，顆粒呈紅紫色/深藍色（異染性），菌體呈淺藍色。
     • 糞便白血球：觀察糞便中的發炎細胞。
2. 易混淆染色：
   • 背景綠色：通常與 Malachite Green (如芽孢染色) 或 Light Green (如 GMS, Papanicolaou stain) 有關。

參考資料

1. Methylene Blue stain - Microbe Canvas (描述其用於 N. meningitidis 與 H. influenzae 且背景為 light blue)
2. Methylene Blue, Loefflers - Hardy Diagnostics (確認 CSF 應用及染色結果為藍色)