下列何種試驗，最適合用於鑑別Enterococcus spp.與group D streptococci ？

本題觀念：

本題考查的核心觀念是Enterococcus spp. (腸球菌屬) 與 Group D Streptococci (D群鏈球菌，如 Streptococcus bovis group) 的鑑別診斷。

這兩類細菌在傳統分類上都屬於擁有 Lancefield Group D 抗原的細菌，且在 Bile Esculin (膽汁七葉靈) 試驗中皆呈現陽性（能耐受膽汁並水解 Esculin 使培養基變黑）。因此，臨床檢驗必須依靠其他特定的生化試驗來區分它們，其中最關鍵的兩個試驗是 PYR 試驗 和 6.5% NaCl 生長試驗。

選項分析

• A. L-pyrrolidonyl-β-naphthylamide (PYR) 水解試驗：正確。

  • 原理：測試細菌是否產生 L-pyrrolidonyl arylamidase (PYRase) 酶，能水解基質 L-pyrrolidonyl-β-naphthylamide。
  • 結果判讀：
    • Enterococcus spp.：陽性 (+) (呈現紅色)。
    • Group D Streptococci (如 S. bovis / S. gallolyticus)：陰性 (-)。
    • 此外，Group A Streptococci (S. pyogenes) 也是 PYR 陽性，但它是 β-溶血且 Bacitracin 敏感，易與腸球菌區分。
  • 結論：這是快速且準確區分這兩類細菌的最佳試驗之一。

• B. bacitracin 試驗：錯誤。

  • 用途：主要用於鑑別 Group A Streptococci (S. pyogenes)（對 Bacitracin 敏感/Susceptible）與其他 β-溶血型鏈球菌（如 Group B，通常具抗性）。
  • 本題適用性：Enterococcus 和 Group D Streptococci 通常對 Bacitracin 具抗性，無法藉此區分。

• C. Lancefield's serogrouping (蘭斯菲爾德血清分群)：錯誤。

  • 用途：根據細菌細胞壁的碳水化合物抗原進行分類。
  • 本題適用性：Enterococcus spp. 和 Group D Streptococci 的細胞壁上都擁有 Group D 抗原。如果使用 Group D 的抗血清進行測試，兩者都會產生凝集反應 (陽性)，因此無法用此法區分彼此。事實上，腸球菌以前就被歸類為 Group D Streptococcus，後來才獨立成一個屬。

• D. CAMP 試驗：錯誤。

  • 用途：主要用於鑑定 Group B Streptococci (S. agalactiae)。Group B Strep 會產生 CAMP因子，與金黃色葡萄球菌的 β-lysin 產生協同溶血作用，形成箭頭狀溶血區。
  • 本題適用性：Enterococcus 和 Group D Streptococci 的 CAMP 試驗通常為陰性（少數 E. faecalis 可能有例外反應，但非主要鑑別法），故不適合作為首選鑑別試驗。

答案解析

要鑑別 Enterococcus spp. 與 Group D Streptococci，檢驗流程通常如下：

1. Bile Esculin 試驗：兩者皆為陽性（變黑），可排除 Viridans streptococci。
2. 區分試驗：
   • PYR 試驗：Enterococcus (+), Group D Strep (-)。
   • 6.5% NaCl 生長試驗：Enterococcus (+, 能生長), Group D Strep (-, 不生長)。

選項中僅有 A (PYR 試驗) 能有效區分兩者。

核心知識點

考生應熟記以下革蘭氏陽性球菌(GPC)的重要鑑別表：

試驗項目	Enterococcus spp. (腸球菌)	Group D Streptococci (非腸球菌 D群，如 S. bovis)	Group A Streptococci (S. pyogenes)	Group B Streptococci (S. agalactiae)
溶血形式	通常 γ (不溶血) 或 α，少數 β	通常 γ 或 α	β (完全溶血)	β (窄環)
Lancefield Group	D	D	A	B
PYR 試驗	陽性 (+)	陰性 (-)	陽性 (+)	陰性 (-)
6.5% NaCl 生長	陽性 (+) (混濁)	陰性 (-)	陰性 (-)	部分可生長 (變異大)
Bile Esculin	陽性 (+) (變黑)	陽性 (+) (變黑)	陰性 (-)	陰性 (-)
CAMP 試驗	陰性 (-)	陰性 (-)	陰性 (-)	陽性 (+)
Bacitracin	抗性 (R)	抗性 (R)	敏感 (S)	抗性 (R)

• 口訣記憶：腸球菌是 "強" 球菌，能耐鹽 (6.5% NaCl)、耐膽汁 (Bile Esculin)、PYR 也強 (陽性)。而 Group D Strep 只能耐膽汁，不能耐鹽且 PYR 陰性。

參考資料

1. MicrobiologyInfo.com: PYR Test- Principle, Uses, Procedure and Result Interpretation.
2. Hardy Diagnostics: PYR Test Kit Instructions and Limitations.
3. UK Standards for Microbiology Investigations: Identification of Streptococcus species, Enterococcus species and morphologically similar organisms.