下列何種細菌在 cycloserine-cefoxitin-fructose agar 培養基上，呈現黃色磨砂玻璃形狀的菌落？

本題觀念：

本題考查的是厭氧菌的選擇性培養基及其特定的菌落型態，特別是針對 困難梭狀桿菌 (Clostridioides difficile) 的鑑別診斷。

選項分析

• A. Clostridioides difficile：**正確。

  • 培養基：Cycloserine-Cefoxitin-Fructose Agar (CCFA) 是分離 C. difficile 的標準選擇性暨鑑別培養基。
  • 選擇性原理：Cycloserine 和 Cefoxitin 兩種抗生素能抑制大部分腸道正常菌叢（如大腸桿菌、大部分革蘭氏陰性菌及部分革蘭氏陽性菌）的生長。
  • 鑑別原理：C. difficile 能發酵培養基中的果糖 (Fructose)，產酸後使酸鹼指示劑（Neutral red）由紅轉黃。
  • 菌落型態：典型的 C. difficile 在 CCFA 上呈現 黃色 (Yellow)、磨砂玻璃狀 (Ground-glass appearance) 的菌落。此外，在紫外線 (UV light) 照射下常會發出黃綠色 (Chartreuse) 的螢光，並伴隨特殊的馬廄味 (Horse stable odor, 由 p-cresol 造成)。

• B. Clostridium tetani (破傷風梭菌)：錯誤。

  • C. tetani 具有高度游走性，在一般的血液培養基 (Blood Agar) 上常呈現 擴散生長 (Swarming) 或形成薄膜狀，而非磨砂玻璃狀菌落。且 CCFA 中的抗生素通常會抑制其生長。

• C. Clostridium perfringens (產氣莢膜梭菌)：錯誤。

  • C. perfringens 在厭氧血液培養基上最著名的特徵是具 雙溶血環 (Double zone of hemolysis)。雖然它生長快速，但 CCFA 中的 Cycloserine 和 Cefoxitin 濃度通常足以抑制或顯著限制其生長，且其菌落型態並非典型的黃色磨砂玻璃狀。

• D. Clostridium botulinum (肉毒桿菌)：錯誤。

  • C. botulinum 的鑑別通常依賴於毒素檢測或在 EYA (Egg Yolk Agar) 上觀察 Lipase 陽性反應（珍珠光澤）。CCFA 並非用於分離肉毒桿菌的首選培養基。

答案解析

Cycloserine-cefoxitin-fructose agar (CCFA) 是專門設計用來從糞便檢體中分離 困難梭狀桿菌 (Clostridioides difficile) 的選擇性培養基。在此培養基上，C. difficile 因發酵果糖而使菌落周圍變黃，並呈現特有的「磨砂玻璃狀 (Ground-glass)」外觀。因此，選項 (A) 為正確答案。

核心知識點

1. CCFA 培養基：
   • 成分：Cycloserine (抑制 G-), Cefoxitin (抑制 G+ & G-), Fructose (鑑別糖)。
   • 目標菌：Clostridioides difficile。
   • 特徵：黃色 (Yellow)、磨砂玻璃狀 (Ground-glass)、馬廄味 (Horse stable odor)、UV 下黃綠色螢光 (Chartreuse fluorescence)。
2. 分類學更名：需注意 Clostridium difficile 已更名為 Clostridioides difficile，但縮寫仍通用為 C. difficile 或 C. diff。
3. 臨床關聯：C. difficile 是抗生素相關偽膜性結腸炎 (Pseudomembranous colitis) 的主要病原菌。

參考資料

1. Thermoscientific - Clostridium Difficile Agar Instructions
2. ASM Journals - Use of cycloserine-cefoxitin-fructose agar...
3. CDC - Clostridioides difficile (C. diff) Information