以creatininase-creatinase-H 2O2測定肌酸酐（ creatinine ）之敘述，下列何者最不適當？

本題觀念：

本題考查的是肌酸酐（Creatinine）的酵素測定法，特別是「Creatininase-Creatinase-Sarcosine Oxidase-POD」系統的反應原理、酵素特性及干擾因素。這是臨床生化檢驗中測定肌酸酐的主要方法之一，旨在改善傳統 Jaffe 法（苦味酸法）特異性不足的問題。

選項分析

• A. creatininase與creatinase皆為水解酶（hydrolase）：正確。

  • Creatininase (Creatinine amidohydrolase, EC 3.5.2.10) 催化肌酸酐（Creatinine）水解生成肌酸（Creatine）。
  • Creatinase (Creatine amidinohydrolase, EC 3.5.3.3) 催化肌酸（Creatine）水解生成肌氨酸（Sarcosine）和尿素（Urea）。
  • 兩者均透過加入水分子斷裂化學鍵，屬於水解酶類（Hydrolases）。

• B. 可生成urea：正確。

  • 如上所述，在第二步反應中，Creatinase 將 Creatine 水解為 Sarcosine 和 Urea（尿素）。因此，此反應路徑中確實會生成 Urea 作為副產物。

• C. 尚需搭配 sarcosine oxidase 進行反應：正確。

  • 題目描述的方法為「creatininase-creatinase-H2O2」。為了產生 H2O2（過氧化氫）以供後續檢測（通常配合 Peroxidase 進行呈色反應），必須將前一步驟產生的 Sarcosine 進一步氧化。
  • Sarcosine Oxidase (EC 1.5.3.1) 催化反應：Sarcosine + O2 + H2O → Glycine + Formaldehyde + H2O2。因此，Sarcosine oxidase 是此反應系統產生 H2O2 的關鍵酵素。

• D. ascorbic acid 會造成負干擾：最不適當（答案）。

  • 理論背景：在傳統的過氧化酶（Peroxidase, POD）耦合呈色反應（Trinder reaction）中，Ascorbic acid（維生素C）作為強還原劑，確實會與色原（Chromogen）競爭 H2O2 或將已生成的有色產物還原，導致顏色變淡，造成負干擾。
  • 為何選D：雖然化學機制上會造成負干擾，但現行的臨床試劑與檢測方法為了克服此問題，幾乎都在試劑中添加了抗壞血酸氧化酶（Ascorbate Oxidase）。此酵素能在反應開始前將檢體中的 Ascorbic acid 氧化為 Dehydroascorbic acid，使其不參與後續的氧化還原反應，從而消除了其干擾。
  • 相較於 A、B、C 三個選項是對反應路徑與酵素本質的絕對事實描述，選項 D 描述的干擾在現代標準化檢驗試劑中已被有效解決（即實際上「不會」造成干擾），或者相較於 Jaffe 法的嚴重正干擾，酵素法的抗干擾能力已大幅提升。因此，在考試邏輯中，將一個「已被常規解決的問題」描述為該方法的固有缺陷（會造成...），相較於其他絕對正確的選項，是「最不適當」的敘述。
  • 註：若使用電極法（Amperometric method）偵測 H2O2，Ascorbic acid 因在電極表面氧化會造成電流增加，反而可能造成正干擾，這也使得 D 的「負干擾」敘述不完全適用於所有酵素法系統。

答案解析

選項 D 為最不適當的敘述。 酵素法測定 Creatinine 的主要反應步驟包含 Creatininase、Creatinase 和 Sarcosine Oxidase，過程中確係水解反應並生成 Urea 與 H2O2，故 A、B、C 均正確。 關於選項 D，雖然 Ascorbic acid 本質上會干擾過氧化酶反應（負干擾），但現代商用酵素法試劑普遍添加 Ascorbate Oxidase 來預先排除此干擾，因此在實際臨床應用上，Ascorbic acid 對酵素法的影響已微乎其微（甚至被視為無干擾）。此外，若與 Jaffe 法相比，Jaffe 法受 Ascorbic acid 造成假性升高的正干擾更為顯著，酵素法正是為解決特異性問題而生。因此，斷言其「會造成負干擾」忽略了試劑配方的改良，是四個選項中相對最不適當的。

核心知識點

1. 肌酸酐酵素法流程：
   • Creatinine + H2O --(Creatininase)--> Creatine
   • Creatine + H2O --(Creatinase)--> Sarcosine + Urea
   • Sarcosine + O2 + H2O --(Sarcosine Oxidase)--> Glycine + HCHO + H2O2
   • H2O2 + Chromogen --(Peroxidase)--> Colored Product
2. 酵素特性：Creatininase 與 Creatinase 皆為水解酶（Hydrolase）。
3. 干擾與排除：
   • Jaffe 法：易受 Protein, Glucose, Ascorbic acid, Ketones (Acetoacetate), Cephalosporins 等造成正干擾。Bilirubin 造成負干擾。
   • 酵素法：特異性較高。原受 Ascorbic acid（負干擾）與 Bilirubin（負干擾）影響，但現代試劑多添加 Ascorbate Oxidase 消除維生素 C 干擾，並使用 Bilirubin Oxidase 或 ferrocyanide 減少膽紅素干擾。

參考資料

1. Interferences in current methods for measurements of creatinine - PubMed
2. Creatinase - Wikipedia
3. Creatininase - Wikipedia
4. Creatinine Enzymatic method Reagent Insert (e.g., Biolabo, Labtest) - Confirming presence of Ascorbate Oxidase.