ExamWise
115年:(醫檢)免疫病毒(1)

下列何種染劑不應用於分析細胞內核酸？

API（propidium iodide ）
BDAPI
CHoechst 33342
DSudan Ⅲ

詳細解析

本題觀念：

本題考查醫學檢驗中常用的細胞化學染色劑（Cytochemical Stains）及其對應的標的分子（Target Molecules）。重點在於區分「核酸染劑」與「脂質染劑」的應用差異。

  • 核酸染劑：通常具有平面芳香環結構，能嵌入鹼基對之間（Intercalation）或結合於 DNA 小溝（Minor groove），受激發後產生螢光，用於細胞週期分析、細胞核定位或死活細胞判別。
  • 脂質染劑：屬於溶色劑（Lysochrome），即脂溶性色素，利用物理溶解度差異溶於細胞內的脂滴中，而非與組織產生化學鍵結。

選項分析

  • A. PI（Propidium iodide，碘化丙啶）：錯誤（是核酸染劑）

    • 性質：一種紅色的螢光染劑。
    • 機制：屬於嵌入劑（Intercalating agent），能嵌入雙股 DNA 或 RNA 的鹼基對之間。
    • 應用：PI 不具有細胞膜通透性（Cell-impermeant），故常用於標示死細胞（細胞膜破損）或經固定打洞後的細胞核。常配合流式細胞儀（Flow Cytometry）進行細胞週期（Cell Cycle）分析（需先用 RNase 移除 RNA 以便專一性定量 DNA）。

  • B. DAPI：錯誤（是核酸染劑）

    • 性質：一種藍色的螢光染劑。
    • 機制：專一性結合於雙股 DNA 的 A-T rich 區域（結合於小溝 Minor groove）。
    • 應用：常用於螢光顯微鏡下的細胞核計數或流式細胞儀分析。對活細胞的通透性較差（Semi-permeant），但在高濃度或長時間作用下可進入，通常用於固定後的細胞染色。

  • C. Hoechst 33342：錯誤（是核酸染劑）

    • 性質：一種藍色的螢光染劑（Bisbenzimide 衍生物）。
    • 機制：結合於雙股 DNA 的 A-T rich 區域（Minor groove binder）。
    • 應用：具有良好的細胞膜通透性（Cell-permeant），可直接進入活細胞染細胞核 DNA。常用於活細胞分選（如造血幹細胞的 Side Population 分析）或活細胞週期研究。

  • D. Sudan Ⅲ（蘇丹三號）：正確（非核酸染劑）

    • 性質：一種偶氮染料（Azo dye），屬於脂溶性色素（Lysochrome）。
    • 機制：基於物理溶解原理，該染劑在脂質中的溶解度遠大於在溶劑（通常為醇類）中的溶解度，因此會由溶劑轉移並溶解於組織內的脂滴中。
    • 應用：專門用於分析細胞或組織內的中性脂質（Neutral lipids），如三酸甘油酯（Triglycerides）。常見於糞便脂肪檢查或組織切片的脂肪染色，呈現橘紅色。它不與核酸結合，因此不應用於分析細胞內核酸。

答案解析

題目要求選出「不應用於分析細胞內核酸」的染劑。

  • 選項 A、B、C 均為實驗室標準的螢光核酸染劑，廣泛應用於細胞週期、細胞凋亡及顯微鏡成像。
  • 選項 D Sudan Ⅲ 是經典的脂質染劑，用於觀察脂肪堆積，與核酸分析無關。

故正確答案為 D。

核心知識點

醫事檢驗師考生應熟記常見染劑的分類與標的：

  1. 核酸螢光染劑 (Nucleic Acid Stains)：

    • 嵌入型 (Intercalating)：PI (死細胞/固定細胞, DNA/RNA)、Ethidium Bromide (EtBr)。
    • 小溝結合型 (Minor Groove Binders)：DAPI (A-T rich, 固定細胞為主)、Hoechst 33342 (A-T rich, 活細胞可用)。
    • 應用：細胞週期分析 (Cell Cycle)、細胞核定位、死活細胞鑑別 (Viability)。

  2. 脂質染劑 (Lipid Stains)：

    • 常見種類：Sudan Ⅲ (橘紅)、Sudan IV (紅)、Sudan Black B (黑)、Oil Red O (油紅O)。
    • 機制：物理性溶解 (Physical solution)，染劑溶於脂質中。
    • 應用：脂肪便 (Steatorrhea) 篩檢、脂肪肝或動脈粥狀硬化斑塊染色。

參考資料

  1. Thermo Fisher Scientific. Propidium Iodide Nucleic Acid Stain. User Guide.
  2. Abcam. DAPI staining protocol.
  3. Biotium. Hoechst & DAPI Nuclear Stains.
  4. Sigma-Aldrich. Sudan III Specification Sheet. (Sudan III is certified for use in staining lipids).
了解本站架構