有關shell vial 技術之敘述,下列何者最不適當?
詳細解析
本題觀念:
Shell Vial 培養技術 (離心加強式細胞培養法)
Shell vial technique (Shell vial culture) 是一種改良的病毒培養方法,主要用於快速檢測病毒。其核心原理結合了兩個關鍵步驟:
- 低速離心 (Low-speed centrifugation):將檢體接種到生長於蓋玻片(coverslip)上的細胞單層後,利用低速離心力(通常約 700 x g, 40分鐘)幫助病毒顆粒更有效率地接觸並進入細胞,從而提高感染率並縮短潛伏期。
- 早期抗原偵測 (Early antigen detection):不需要等待細胞產生肉眼可見的細胞病變 (Cytopathic effect, CPE)。通常在接種後 24-48 小時內,直接固定細胞並使用特異性的單株抗體進行免疫螢光染色 (Immunofluorescence staining),偵測病毒的早期蛋白(如 CMV 的 Immediate Early Antigen)。
選項分析
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A. 接種檢體後,需經過低速離心處理:適當。 這是 Shell vial 技術的標誌性步驟。接種後會將培養小瓶放入離心機中進行低速離心(centrifugation-enhanced inoculation),利用離心力克服病毒與細胞間的電荷排斥或擴散障礙,促進病毒吸附與穿透細胞,顯著提高檢測敏感度。
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B. 需先觀察細胞病變,再用免疫螢光染色確認:最不適當。 Shell vial 的最大優勢在於**「不需要」等待 CPE 出現**。傳統試管培養 (Tube culture) 需要數天甚至數週等待 CPE 產生,而 Shell vial 技術是在固定的短時間內(通常是 24~48 小時),無論有無 CPE,直接進行免疫螢光染色來偵測病毒抗原。若需等待 CPE 出現才染色,就失去了此技術「快速診斷」的意義,且許多病毒(如 CMV)產生 CPE 的速度非常慢。
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C. 可縮短病毒檢測時間:適當。 由於利用離心加速感染,且不需等待 CPE 成熟,直接偵測病毒早期抗原,檢測時間可從傳統培養的數天至數週縮短至 1-2 天 (24-48小時)。
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D. 可用來培養及鑑定巨細胞病毒:適當。 Shell vial 技術最初就是為了克服巨細胞病毒 (CMV) 傳統培養生長緩慢(需 1-3 週才出現 CPE)的問題而開發的。利用此技術偵測 CMV 的立早期抗原 (Immediate Early Antigen, IEA),是臨床病毒室診斷 CMV 的經典方法。此技術也適用於 HSV, VZV, Influenza, Adenovirus 等病毒。
答案解析
本題問何者最不適當。選項 (B) 描述的流程(先觀察 CPE 再染色)是傳統培養確認病毒的邏輯,或者是某些混合細胞株(如 R-Mix)的觀察方式,但對於強調「快速偵測」的 Shell vial 技術而言,其核心價值正是在 CPE 出現之前 (Pre-CPE) 就透過免疫染色偵測病毒抗原。若依選項 B 操作,將無法達到縮短時間的目的,故為錯誤敘述。
核心知識點
- Shell Vial Technique (離心培養法) 三大要素:
- 離心 (Centrifugation):低速離心 (700 x g) 增強病毒感染效率。
- 快速 (Speed):通常於 24-48 小時收檢,不需等待 CPE。
- 免疫螢光染色 (Immunofluorescence):利用單株抗體偵測病毒早期抗原 (Viral Antigens)。
- 應用病毒:最經典且最常用於 CMV (巨細胞病毒) 的快速培養(偵測 IE 抗原),亦廣泛用於呼吸道病毒 (Influenza, RSV, Adenovirus) 及 HSV/VZV。
- 與傳統比較:敏感度通常較高或相當,但速度快很多。缺點是一次只能針對特定幾種病毒進行染色(需預設目標病毒選擇抗體)。
參考資料
- Shell Vial Cell Culture: Principle, Procedure and Uses - Microbe Online
- Comparison of shell vial assay and conventional tube cell culture for detection of enterovirus from clinical specimens - ResearchGate
- Evaluation of number of shell vial cell cultures per clinical specimen for rapid diagnosis of cytomegalovirus infection - Journal of Clinical Microbiology