有關聚合 酶鏈反應（ polymerase chain reaction ）之步驟，下列何者為正確順序？ ①核酸引子和 DNA 雜交②DNA 被分離成兩股 ③加入 DNA 聚合 酶以複製標的（ target ）的核酸序列

本題觀念：

本題考查的是**聚合酶連鎖反應（Polymerase Chain Reaction, PCR）**的核心原理與標準操作流程。PCR 是一種在試管中大量複製特定 DNA 片段的分子生物學技術，其循環反應由溫度控制的三個主要步驟組成。

選項分析

PCR 的每一個循環包含以下三個連續步驟：

1. 變性（Denaturation）：

   • 溫度：通常加熱至 94-98°C。
   • 原理：高溫破壞 DNA 雙螺旋結構間的氫鍵，使雙股 DNA 分離成兩條單股 DNA，作為後續複製的模板。
   • 對應題幹描述：② DNA 被分離成兩股。

2. 黏合（Annealing，或稱降溫/雜交）：

   • 溫度：通常降溫至 50-65°C（視引子的 Tm 值而定）。
   • 原理：溫度降低後，設計好的兩段核酸引子（Primers）會專一性地與單股 DNA 模板上的互補序列結合（雜交）。
   • 對應題幹描述：① 核酸引子和 DNA 雜交。

3. 延伸（Extension / Elongation）：

   • 溫度：通常升溫至 72°C（Taq 聚合酶的最佳作用溫度）。

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