下列關於 nested PCR 的敘述，何者正確？

本題觀念：

Nested PCR（巢式聚合酶連鎖反應）是一種兩階段 PCR 技術，藉由使用兩組引子（外側引子與內側引子）提升 PCR 的專一性與靈敏度。其核心特徵是：第一輪 PCR 的擴增產物作為第二輪 PCR 的模板。

選項分析

(A) 以 RNA 直接進行 PCR 以 RNA 為模板的技術是 RT-PCR（reverse transcription PCR）— 需先以逆轉錄酶（reverse transcriptase）將 RNA 逆轉錄成 cDNA，再進行 PCR 擴增。RNA 無法直接作為 DNA 聚合酶的模板進行 PCR。此描述不符合 nested PCR 的定義。

(B) 以第一個 PCR 的產物當作第二個 PCR 的模板來進行反應 ✅ 正確 Nested PCR 的定義性特徵即為：

1. 第一輪（outer PCR）：以樣本基因組 DNA 為模板，使用**外側引子（outer primers）**擴增較長片段（約 15–30 個循環）。
2. 第二輪（inner PCR）：取第一輪 PCR 產物（通常稀釋 100–1,000 倍）作為模板，使用內側引子（inner primers/nested primers），其位置位於第一輪引子之內側，擴增更短、更特異的片段。 此雙重擴增大幅提升特異性，因為非特異

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