106年:(醫檢)檢驗(1)
檢測鐮刀型貧血的 β-globin 基因，設計的兩條探針分別與正常及突變後的基因序列完全互補，再利用雜交的方式分析是同型合子或異型合子，則此種檢驗方式為下列何者？
A原位螢光雜交（ Fluorescence in situ hybridization, FISH ）
B等位基因特異性寡核 苷酸雜交（Allele-specific oligonucleotide hybridization, ASO ）
C突變分辨聚合 酶連鎖反應（ Mutagenically separated polymerase chain reaction, MS-PCR ）
D異源雜合雙鏈分析法（ Heteroduplex analysis ）
詳細解析
本題觀念：
本題描述一種利用特異性探針（probe）與目標基因雜交（hybridization）的方法，針對鐮刀型貧血（sickle cell anemia）的 β-globin 基因設計兩條探針，分別辨識正常序列與突變序列，以判斷個體的基因型（同型合子/異型合子）。此原理正是等位基因特異性寡核苷酸雜交法（allele-specific oligonucleotide hybridization, ASO）。
選項分析
(A) 原位螢光雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH） FISH 是將螢光標記的探針與染色體（固定於玻片上的組織切片或細胞）雜交，主要用於染色體異常的偵測（如染色體數目異常、大片段缺失、基因重排等）。FISH 的探針較長，不適用於僅相差一個鹼基的單點突變（如鐮刀型貧血的 Glu→Val 突變）偵測。
(B) 等位基因特異性寡核苷酸雜交（Allele-specific oligonucleotide hybridization, ASO）→ 正確答案 ASO 方法的原理：
- 合成兩條短的寡核苷酸探針（約 15–21 個鹼基），分別與正常 β-globin 序列和突變 β-globin 序列完全互補
- 嚴格洗滌條件（stringent washing）
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