某一基因片段的序列為 5'-GCATCGTTCGTT AGGCCCGGAAC-3' 。在腫瘤組織中畫底線處的核 苷酸A常突變為T。醫事檢驗師 X先生以上述的序列為模板，利用 DHPLC 中primer extension 的原理建立檢測該種突變的方法，在primer extension 的反應中含有下列何種核 苷酸可以使正常與突變基因 primer extension 產物的長度差異最大？

本題觀念：

本題考核 DHPLC（denaturing high-performance liquid chromatography）中 primer extension 技術的原理，特別是利用不同的鏈終止核苷酸（dideoxynucleotide triphosphates，ddNTPs）來放大正常（normal）與突變（mutant）基因的 primer extension 產物長度差異。選擇能造成最大長度差異的 ddNTP 是解題關鍵。

題目資訊整理：

• 模板序列（template sequence）：5'-GCATCGTTCGTTAGGCCCGGAAC-3'（底線 A = 正常；腫瘤中突變為 T）
• 正常模板：突變位置為 A
• 突變模板（腫瘤）：突變位置為 T
• 目標：選擇哪種 ddNTP 使正常與突變的 primer extension 產物長度差異最大

選項分析

Primer extension 原理： Primer 接合在模板互補鏈上，其 3' 端緊鄰突變位置的前一個核苷酸。DNA 聚合酶從突變位置開始合成新股，依序讀取模板（從左至右讀取 5'→3' 方向的互補股，即 依照 sense strand 序列合成新股）。當反應混合物中**只含某種 ddNTP（而無對應的 dNTP

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