106年:(醫檢)生化(1)

完全不含 tryptophan 和tyrosine 的蛋白質無法使用下列何種方法定量?

AKjeldahl method
Bbiuret method
CLowry method
Ddye-binding method

詳細解析

本題觀念:

常見蛋白質定量方法的原理,特別是 Lowry method(Lowry 法) 的反應機制需依賴芳香族胺基酸(tryptophan、tyrosine)的存在。若蛋白質完全不含這兩種胺基酸,Lowry 法的呈色反應將大幅受損,導致無法正確定量。

選項分析

(A) Kjeldahl method
Kjeldahl 法透過硫酸消化蛋白質,測量所有含氮量,再換算為蛋白質量。此方法測定的是氮元素,與胺基酸種類無關,不受 tryptophan/tyrosine 的有無影響。

(B) Biuret method
Biuret 法利用 Cu2+\text{Cu}^{2+} 在鹼性環境下與肽鍵(peptide bond)反應形成紫色錯合物。反應依賴肽鍵,不依賴特定胺基酸側鏈,因此與 tryptophan/tyrosine 無關。

(C) Lowry method本題答案
Lowry 法分兩步:

  1. Biuret 反應:Cu2+\text{Cu}^{2+} 被肽鍵還原為 Cu+\text{Cu}^{+}
  2. **Folin-Ciocalteu 試劑(磷鎢鉬酸)**被 Cu+\text{Cu}^{+} 及酪胺酸(tyrosine)、色胺酸(tryptophan)的酚羥基/吲哚基還原,產生藍綠色(molybdenu

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