106年:(醫檢)生化(1)
下列何種方法適合用來分離 Ala-Phe-Ser 與Ala-Ala-Ser 兩種 tripeptides ?
Aaffinity chromatography
Bgel filtration
Cion-exchange chromatography
Dreversed-phase HPLC
詳細解析
本題觀念:
分離結構相似的兩種三胜肽(tripeptide)所應選擇的層析方法。Ala-Phe-Ser 與 Ala-Ala-Ser 的分子量相近(分別約 323 Da 與 261 Da,差異來自 Phe 與 Ala 的側鏈質量差),且兩者在生理 pH 下的帶電性質類似(相同的 N 端和 C 端,相似的側鏈電荷),但關鍵區別在於苯丙胺酸(phenylalanine, Phe)具有芳香環側鏈,疏水性(hydrophobicity)遠高於丙胺酸(alanine, Ala)。
選項分析
(A) affinity chromatography(親和層析) 親和層析(affinity chromatography)是利用生物分子與固定化配體之間的特異性親和力(如抗原-抗體、酶-基質)進行分離,需要特定的配體設計。對於分離結構相似的小胜肽,親和層析不適用,因為這兩種三胜肽並無特定的親和配體可供利用。
(B) gel filtration(凝膠過濾層析/分子篩層析) 凝膠過濾(gel filtration chromatography,又稱 size-exclusion chromatography, SEC)依據分子大小(流體力學體積)分離。Ala-Phe-Ser(MW ≈ 323 Da)與 Ala-Ala-Ser(MW ≈ 261 Da)雖然
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