免疫螢光染色試驗，檢測病毒分離之細胞內病毒抗原的直接抹片製備步驟為何？ ①將細胞製成懸浮液，低速離心，去上清液 ②加磷酸鹽緩衝液 ③室溫自然乾燥 ④細胞沉澱製成懸浮液 ⑤滴細胞懸浮液於玻璃抹片 ⑥用丙酮固定

本題觀念：

本題考免疫螢光染色（immunofluorescence staining, IFA）中，將病毒分離培養所得的感染細胞製備成直接抹片（direct smear）的標準步驟順序。關鍵在於理解步驟的邏輯：先去除培養基干擾（低速離心去上清液）→ 磷酸鹽緩衝液（phosphate-buffered saline, PBS）清洗 → 重新懸浮細胞 → 塗抹於玻璃片 → 自然乾燥 → 丙酮（acetone）固定。

題目步驟編號說明：

• ①將細胞製成懸浮液，低速離心，去上清液
• ②加磷酸鹽緩衝液
• ③室溫自然乾燥
• ④細胞沉澱製成懸浮液
• ⑤滴細胞懸浮液於玻璃抹片
• ⑥用丙酮固定

選項分析

正確步驟邏輯分析：

標準操作流程（SOP）：

1. 將感染細胞製成懸浮液並低速離心去上清液（步驟①），目的是去除培養基（culture medium）中可能干擾染色的蛋白質和雜質。
2. 加 PBS 清洗細胞沉澱（步驟②），去除殘留培養基成分。
3. 將清洗後的細胞沉澱重新製成懸浮液（步驟④），使細胞均勻分散。
4. 將細胞懸浮液滴於玻璃抹片（步驟⑤），製成細胞塗片。
5. 室溫自然乾燥（步驟③），讓細胞附著在玻璃片上並去除多餘水分。
6. 丙酮固定（步驟⑥），固定並穿透（permeabilize）細胞膜，以利後續抗體進入細胞內結合病毒抗原。

因此，正確

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