106年:(醫檢)免疫病毒(1)
為避免聚合 酶連鎖反應( polymerase chain reaction, PCR )汙染,下列敘述何者錯誤?
A檢體以紫外線處理,去除 DNA 污染
B分別於不同房間處理:核酸抽取、聚合 酶連鎖反應、跑 DNA 電泳
C使用 aerosol-resistant tip ,避免 DNA 污染到吸量管分注器
D即使是 RT-PCR ,儘量於單一試管( single tube )處理及反應
詳細解析
本題觀念:
本題為反向題(問「何者錯誤」),考核聚合酶連鎖反應(polymerase chain reaction, PCR)汙染防制措施。PCR 具有極高的靈敏度,微量的核酸汙染即可造成偽陽性(false positive)。防制策略包含物理分隔(separate rooms)、使用防汙染耗材(aerosol-resistant tips)、化學或物理去汙(UV、bleach)以及分子技術(dUTP/UNG 系統)。本題重點在於辨別「紫外線(UV)處理檢體去除 DNA 汙染」的正確性。
選項分析
(A) 檢體以紫外線處理,去除 DNA 污染 ❌(錯誤 = 答案) 此述說法錯誤。UV 照射的確可以使 DNA 形成胸腺嘧啶二聚體(thymine dimer),破壞 DNA 使其無法作為 PCR 模板,因此 UV 是對環境表面、工作台、空白試劑進行去汙染的有效方法。但不應對臨床檢體(sample)進行 UV 照射,因為這樣會同時破壞待測標的 DNA(target DNA),導致偽陰性(false negative),完全失去檢測意義。正確的做法是對工作區域(工作台、移液器、PCR 試劑配製區)進行 UV 照射,而非對檢體本身。
(B) 分別於不同房間處理:核酸抽取、聚合酶連鎖反應、跑 DNA 電泳 ✅(正確) 這是標準的 PC
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