關於南方墨點分析（ Southern blot analysis ），下列何者為正確之操作順序？①電泳（ electrophoresis ）②限制酶消化（ restriction enzyme digest ） ③硝化纖維轉印（ nitrocellulose transfer ） ④雜交反應（ hybridization ）

本題觀念：

南方墨點分析（Southern blot analysis）是偵測特定 DNA 序列的經典分子生物學技術，由 Edwin Southern 於 1975 年發明。其核心步驟有固定的邏輯順序：先將大片段基因組 DNA 切割成片段，再依大小分離，再轉印到固相膜上，最後用探針進行雜交偵測。

選項分析

本題步驟代號：

• ①電泳（electrophoresis）
• ②限制酶消化（restriction enzyme digest）
• ③硝化纖維轉印（nitrocellulose transfer）
• ④雜交反應（hybridization）

(A) ①②③④（電泳 → 限制酶消化 → 轉印 → 雜交）

• 錯誤。電泳必須在限制酶消化之後進行，因為電泳的目的是分離「已被限制酶切割後的 DNA 片段」。若未先消化，基因組 DNA 無法進入凝膠有效分離。

(B) ①④②③（電泳 → 雜交 → 限制酶消化 → 轉印）

• 錯誤。順序完全錯亂，雜交應在轉印之後進行。

(C) ②①③④（限制酶消化 → 電泳 → 轉印 → 雜交） ✅

• 正確。此為 Southern blot 的標準步驟順序（詳見答案解析）。

(D) ②①④③（限制酶消化 → 電泳 → 雜交 → 轉印）

• 錯誤。雜交（hybridization）必須在 DN

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