Factor V Leiden 是人類凝血第五因子基因的一種變異型（1691A＞G），會造成先天性高凝血症且易產生血栓。如下圖所示，此A＞G變異會破壞F5（factor V）基因的PCR產物上所具有的其中一個MnlI限制酶切位。若針對帶有homozygous  V Leiden基因變異的檢體進行PCR-RFLP分子檢驗，在進行PCR後，將PCR產物與MnlI限制酶完全反應，並經電泳分析後，將預期看到什麼樣的結果？

本題觀念：

Factor V Leiden 為 F5 基因上常見的單核苷酸多型性（G1691A，蛋白質上表現為 R506Q），此突變會破壞一個 MnlI 限制酶切位，使得 PCR-RFLP 分析中帶有此突變的產物切割模式改變，進而可用於定性分型（野生型、雜合子或純合子）(hematology.mlsascp.com)。

影像分析：

示意圖中：

• 深色長條代表 PCR 擴增出的 F5 目標片段
• 左、右兩端向外的箭頭分別為 forward 與 reverse primers
• 長條上方標記兩個 “MnlI 切位” ，分別位於擴增片段之中
• 靶點第二個 MnlI 切位處以星號標示突變位置，代表該 G>A 突變會破壞此切位

因此，野生型片段有兩處 MnlI 切位，完全消化後可將 PCR 產物切成三段；若為純合子 Leiden（兩條等位基因均帶突變），則僅剩第一處切位可切割，預期消化後出現兩段片段。

選項分析

• 選項A 兩個片段
  以純合子 Leiden 考量，原有兩處切位僅剩一處能被 MnlI 切割，PCR 產物應被切成兩段，對應本題情境，正確。
• 選項B 三個片段

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